| Извършване на приложни научни изследвания, тествания, изпитвания и измервания , свързани с разработването на иновативния продукт и процес (ще бъде изпълнена чрез наемане на квалифициран персонал - 10 души, закупуване на материали и консумативи, необходими за изследването): Дейността представлява научни изследвания, тествания и изпитвания по разработването на иновативна технология за увеличаване нивата на производство на МК-7 до над 30мг на литър и включва:
1. Оптимизиране на процеса;
2. Класическо оптимизиране на щама чрез мутационно-селекционен подход;
3. Оптимизиране на щама чрез рекомбинантни технологии или т.нар. насочен мутагенез;
Ще се работи паралелно по трите подхода, като за всеки от тях ще се направи прототип, който да бъде доразработван и изследван. В резултат, ще бъде получена технология, комбинираща трите подхода, като по този начин ще постигнем максимален добив. Необходимо е да изследваме най-подходящите параметри и за трите подхода, които са базирани върху следните научни факти:
При бактериите, Менахинон (МК) участва главно в окислително-редукционни реакции, свързани с поддържането на електрохимична мембрана потенциал. Освен това, при Bacillus subtillis, МК изпълнява и няколко регулаторни функции. Допълнителните роли включват участие в регулация на образуване на цитохром и в успешното образуване на ендоспори. Количеството на МК при Bacillus subtilis е свързано и с физиологичното състояние на клетките. В комплексни среди, съдържанието на МК се увеличава до максимум в стационарната фаза и спада бързо до 1/10 от максималната си в рамките на 3 часа. Подобен кинетичен профил има при транскрипционната регулация на menFD оперона.Тези открития предполагат, че регулирането на MK биосинтеза зависи от транскрипционен контрол на гените, отговорни за биосинтеза на МК-7. Проучванията показват, че повишената транскрипционна активност в ранна стационарна фаза може да бъде поддържана и в късна стационарна, когато рН на средата на растеж се понижава от или чрез глюколиза или от външно буфериране към по кисела среда. Така регулирането на продуктивността на МК-7 в Bacillus subtilis зависи от два фактора: (1) фаза на растеж и (2) сигнали от околната среда pH, по които ще работим и извършваме изследователска дейност
Мутационно-селекционен подход за подобряване на щамове микроорганизми се базира на създаването на голям брой мутации, т. нар. промени в генотипа в резултат на прилагането на мутагенен фактор и селекция на желания фенотип. Ще получим по-високо производителни щамове на МК-7 чрез прилагането на N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин (NTG)– един от най-ефективните химични мутагени и директно спектрофотометрично измерване на МК-7 в получените мутантни клонове като метод за селекция. Тази методология ще позволи анализа на голямо количество клонове, като така ще се увеличи шанса за идентифицирането на по-високо производителен клон.
Оптимизиране на щама чрез рекомбинантни ДНК технологии или т.нар. насочен мутагенез:
Доказано е, че МК в Escherichia coli произхожда от хоризмат, междинен компонент от био-синтезата на ароматни аминокиселини или т.нар. шикиматен път, чрез ензимната активност на седем ензима: Мен-А, -B, -C, -D, -E, -F, -G. Четири от тях са организирани в един оперон в хромозомата на E. coli. Във Bacillus subtilis пътя за получаването на МК е подобен на E. coli, но е разделен в две главни транскрипционни единици, съответно menFD и menBE оперони. Регулацията на двата перона във Bacillus e сложна и зависи от много и различни фактори като растежна фаза и сигнали от средата като pH. Гените ензимите за последните стъпки за синтеза на МК-7 като пренилиране и метилиране са добре известни heps-1, menG и heps-2 и организирани в един оперон.
Необходимите консумативи включват хранителни среди, стъклария, пипети и буфери за оптимизиране на лабораторния и производствен процес и класическото оптимизиране на щама, молекулярно биологични реактиви, китове и ензими (рестриктази, полимерази и др). Ще бъде извършена директна ДНК синтеза за получаване на собствени ново-разработени и оптимизирани плазмидни вектори за трансформация в Bacillus. Това ще ни гарантира независимост на научните разработки. При наличност класическите вектори за трансформация на Bacillus ще бъдат ползвани за сравнение. |
127 000.00
|
144 538.07
|
| Създаване и тестване на 4 прототипа на крайни продукти (ще бъде изпълнена чрез закупуване на материали и консумативи, необходими за изработка и изследване на прототипите и с участието на 10 бр квалифициран персонал, наети при дейност 1 ): По тази дейност ще бъдат разработени и тествани прототипи на 4 крайни форми на индустриални продукти, което е част от научното изследване и ще докаже резултатите, които са постигнати в първата дейност. Необходимо е да се достигне до крайни продукти, които да бъдат стабилни, получени в лабораторни условия и демонстрирани в релевантна среда. Всички състави и технологиите за получаването им ще бъдат документирани и описани, като комплектите документация ще са достатъчно пълни, за да бъде възможно с мащабиране и минимален брой допълнителни изследвания и доработка да се внедрят в редовно производство в бъдеще.
Ще бъдат използвани резултатите, получени от дейност 1
Оборудването, необходимо за създаването на протототипите, отново ще бъде използвано безвъзмездно и ще бъде предоставено от партньорска фирма.
Формите ще бъдат разработвани паралелно от микроекипи по проекта от 7-ми до 24-ти месец. |
120 000.00
|
87 011.31
|
| Визуализация на проекта: Още при стартиране на проекта ще се осигури изпълнението на дейностите, свързани с информация и комуникация, съгласно Приложение XII на Регламент (ЕС) № 1303/2013. В информацията, изготвяна и предоставяна във връзка с изпълнението на проекта, във всички отчети за изпълнение на договора (междинни и финален), както и във всички други документи, отнасящи се до изпълнението на дадена дейност по проекта ще бъде упоменат финансовия принос на Европейския фонд за регионално развитие чрез Оперативна програма „Иновации и конкурентоспособност” 2014-2020 . Във всички обяви и публикации, свързани с изпълнението на проекта, ще оповестяваме, че проектът е получил финансиране от ЕФРР чрез ОПИК. По време на изпълнението на проекта ще информираме обществеността за получената от ЕФРР подкрепа, като: а) включим на интернет страницата, каквато предвиждаме да изработим, кратко описание на проекта, включително на неговите цели и резултати и финансовата подкрепа от ЕС; б) ще поставим плакат с информация за проекта (размер А3), в който се споменава финансовата подкрепа от ЕС, на портала на предприятието, в което имаме наети изследователски помещения, тъй като това е видно за обществеността място. Плакатът ще съдържа текстова и визуална информация, съгласно изискванията.
На мястото, на което ще се изпълнява проекта в гр. Пещера, ще бъде поставена информационна табела, съдържаща изискуемата информация
Дейностите по визуализация, информиране и публичност ще бъдат изпълнявани през цялото времетраене на проекта. |
300.00
|
0.00
|
| Защита на индустриална собственост на национално и международно равнище и ползване на необходимата за това експертна помощ (ще бъде изпълнена чрез заявяване на обекти на интелектуална собственост - Европейски патент за изобретение 1 бр и национални полезни модели - 2бр): Ще бъде проведена процедура за избор на европейски и национален патентен представител (7-8ми месец)
Като част от дейността ще бъдат направени проучвания за новост, изобретателска стъпка и ниво на техниката за технологията за повишаване на добивите от целевите щамове (8-ми -9-ти месец).
Ще бъде разработена и подадена заявка за европейски патент (от 9-ти до 12-ти месец)
Ще бъдат извършени проучвания за новост, изобретателска стъпка и ниво на техниката за съставите на крайните продукти.(10-ти -11-ти месец)
Ще бъдат разработени и подадени поне две заявки за полезен модел. (от 11-ти до 12-ти месец)
Необходимо е интелектуалната собственост, възникнала в резултат на изпълнението на проекта, да бъде защитена. Това ще ни осигури значително по-добра конкурентоспособност, тъй като за периодите на действие на патента и полезните модели, ще можем да ограничим копирането на постигнатите от нас резултати. Това ще ни направи лидери на целевите пазари. |
12 000.00
|
11 850.00
|
