Identification

UMIS Number BG16RFOP002-1.005-0074-C02
Project Name Biotechnological production of Menaquinon-7
Beneficiary 112670899 ENDEKTOVET Ltd
Funding ERDF ==> Innovations and Competitiveness
Date of the Contract/Order 16.11.2018
Start Date 16.11.2018
End Date 14.06.2021
Status of Implementation of the Contract/Order of the Grant Closed (completion date)
Location of Performance
  • България, Югозападна и южно-централна България, Южен централен, Пазарджик, Пещера, гр.Пещера

Description

Brief description
Ендектовет е микро предприятие, занимаващо се с научно-изследователска и развойна дейност в областта на биотехнологиите. Този проект се отнася до създаване на иновативни високо-производителна технология за биотехнологично получаване на менахинон-7 – натурална форма на Витамин К2 (МК-7) и формулировки, съдържащи менахинон-7 за фортификация на храни и хранителни продукти. Установено е, че витамин К се състои от две групи молекули – витамин К1 и витамин К2, които имат различни функции. Витамин К1 има директно отношение към коагулацията на кръвта, докато Витамин К2 е свързан с правилното усвояване на калция в организма, от което произтичат значителни ползи за здравето на човека. Той е слабо познат, но положителното му въздействие върху човешкия организъм е доказано и признато.
Ще бъде разработена технология, която дава възможност за голям добив от продукта, като получаването му чрез ферментация позволява крайните формулировки да бъдат етикетирани като "натурални". За целта ще бъдат комбинирани три различни изследователски подхода. 
След получаване на достатъчно голям добив, ще се разработят четири формулировки на крайни продукти, обхващащи всички аспекти, от които индустриалните производители и пазара имат интерес.
Те ще бъдат защитени с патент за изобретение за технологията и полезни модели за съставите. Реализацията на резултатите от проекта е възможна както чрез предоставяне на лицензионни договори за технологията и производство на продуктите, така и чрез производство на самите продукти от индустриални производители под наша собствена марка след допълнителни анализи и разработки.  
Продуктите, които ще бъдат създадени в бъдеще в резултат на разработката, могат да бъдат реализирани както на националния, така и на международните пазари, като потенциалът е изключително голям.
В резултат на изпълнението на проекта  ще бъдат създадени прототипи на технология и формулировки, обект на научно-изследователска и развойна дейност, достигащи поне до ниво TRL6
Activities
  • Activity: Извършване на приложни научни изследвания, тествания, изпитвания и измервания , свързани с разработването на иновативния продукт и процес (ще бъде изпълнена чрез наемане на квалифициран персонал - 10 души, закупуване на материали и консумативи, необходими за изследването): Дейността представлява научни изследвания, тествания и изпитвания по разработването на иновативна технология за увеличаване нивата на производство на МК-7 до над 30мг на литър и включва: 1. Оптимизиране на процеса; 2. Класическо оптимизиране на щама чрез мутационно-селекционен подход; 3. Оптимизиране на щама чрез рекомбинантни технологии или т.нар. насочен мутагенез; Ще се работи паралелно по трите подхода, като за всеки от тях ще се направи прототип, който да бъде доразработван и изследван. В резултат, ще бъде получена технология, комбинираща трите подхода, като по този начин ще постигнем максимален добив. Необходимо е да изследваме най-подходящите параметри и за трите подхода, които са базирани върху следните научни факти: При бактериите, Менахинон (МК) участва главно в окислително-редукционни реакции, свързани с поддържането на електрохимична мембрана потенциал. Освен това, при Bacillus subtillis, МК изпълнява и няколко регулаторни функции. Допълнителните роли включват участие в регулация на образуване на цитохром и в успешното образуване на ендоспори. Количеството на МК при Bacillus subtilis е свързано и с физиологичното състояние на клетките. В комплексни среди, съдържанието на МК се увеличава до максимум в стационарната фаза и спада бързо до 1/10 от максималната си в рамките на 3 часа. Подобен кинетичен профил има при транскрипционната регулация на menFD оперона.Тези открития предполагат, че регулирането на MK биосинтеза зависи от транскрипционен контрол на гените, отговорни за биосинтеза на МК-7. Проучванията показват, че повишената транскрипционна активност в ранна стационарна фаза може да бъде поддържана и в късна стационарна, когато рН на средата на растеж се понижава от или чрез глюколиза или от външно буфериране към по кисела среда. Така регулирането на продуктивността на МК-7 в Bacillus subtilis зависи от два фактора: (1) фаза на растеж и (2) сигнали от околната среда pH, по които ще работим и извършваме изследователска дейност Мутационно-селекционен подход за подобряване на щамове микроорганизми се базира на създаването на голям брой мутации, т. нар. промени в генотипа в резултат на прилагането на мутагенен фактор и селекция на желания фенотип. Ще получим по-високо производителни щамове на МК-7 чрез прилагането на N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин (NTG)– един от най-ефективните химични мутагени и директно спектрофотометрично измерване на МК-7 в получените мутантни клонове като метод за селекция. Тази методология ще позволи анализа на голямо количество клонове, като така ще се увеличи шанса за идентифицирането на по-високо производителен клон. Оптимизиране на щама чрез рекомбинантни ДНК технологии или т.нар. насочен мутагенез: Доказано е, че МК в Escherichia coli произхожда от хоризмат, междинен компонент от био-синтезата на ароматни аминокиселини или т.нар. шикиматен път, чрез ензимната активност на седем ензима: Мен-А, -B, -C, -D, -E, -F, -G. Четири от тях са организирани в един оперон в хромозомата на E. coli. Във Bacillus subtilis пътя за получаването на МК е подобен на E. coli, но е разделен в две главни транскрипционни единици, съответно menFD и menBE оперони. Регулацията на двата перона във Bacillus e сложна и зависи от много и различни фактори като растежна фаза и сигнали от средата като pH. Гените ензимите за последните стъпки за синтеза на МК-7 като пренилиране и метилиране са добре известни heps-1, menG и heps-2 и организирани в един оперон. Необходимите консумативи включват хранителни среди, стъклария, пипети и буфери за оптимизиране на лабораторния и производствен процес и класическото оптимизиране на щама, молекулярно биологични реактиви, китове и ензими (рестриктази, полимерази и др). Ще бъде извършена директна ДНК синтеза за получаване на собствени ново-разработени и оптимизирани плазмидни вектори за трансформация в Bacillus. Това ще ни гарантира независимост на научните разработки. При наличност класическите вектори за трансформация на Bacillus ще бъдат ползвани за сравнение., Contracted Amount: 127 000.00 , Reported Amount: 144 538.07
  • Activity: Създаване и тестване на 4 прототипа на крайни продукти (ще бъде изпълнена чрез закупуване на материали и консумативи, необходими за изработка и изследване на прототипите и с участието на 10 бр квалифициран персонал, наети при дейност 1 ): По тази дейност ще бъдат разработени и тествани прототипи на 4 крайни форми на индустриални продукти, което е част от научното изследване и ще докаже резултатите, които са постигнати в първата дейност. Необходимо е да се достигне до крайни продукти, които да бъдат стабилни, получени в лабораторни условия и демонстрирани в релевантна среда. Всички състави и технологиите за получаването им ще бъдат документирани и описани, като комплектите документация ще са достатъчно пълни, за да бъде възможно с мащабиране и минимален брой допълнителни изследвания и доработка да се внедрят в редовно производство в бъдеще. Ще бъдат използвани резултатите, получени от дейност 1 Оборудването, необходимо за създаването на протототипите, отново ще бъде използвано безвъзмездно и ще бъде предоставено от партньорска фирма. Формите ще бъдат разработвани паралелно от микроекипи по проекта от 7-ми до 24-ти месец., Contracted Amount: 120 000.00 , Reported Amount: 87 011.31
  • Activity: Визуализация на проекта: Още при стартиране на проекта ще се осигури изпълнението на дейностите, свързани с информация и комуникация, съгласно Приложение XII на Регламент (ЕС) № 1303/2013. В информацията, изготвяна и предоставяна във връзка с изпълнението на проекта, във всички отчети за изпълнение на договора (междинни и финален), както и във всички други документи, отнасящи се до изпълнението на дадена дейност по проекта ще бъде упоменат финансовия принос на Европейския фонд за регионално развитие чрез Оперативна програма „Иновации и конкурентоспособност” 2014-2020 . Във всички обяви и публикации, свързани с изпълнението на проекта, ще оповестяваме, че проектът е получил финансиране от ЕФРР чрез ОПИК. По време на изпълнението на проекта ще информираме обществеността за получената от ЕФРР подкрепа, като: а) включим на интернет страницата, каквато предвиждаме да изработим, кратко описание на проекта, включително на неговите цели и резултати и финансовата подкрепа от ЕС; б) ще поставим плакат с информация за проекта (размер А3), в който се споменава финансовата подкрепа от ЕС, на портала на предприятието, в което имаме наети изследователски помещения, тъй като това е видно за обществеността място. Плакатът ще съдържа текстова и визуална информация, съгласно изискванията. На мястото, на което ще се изпълнява проекта в гр. Пещера, ще бъде поставена информационна табела, съдържаща изискуемата информация Дейностите по визуализация, информиране и публичност ще бъдат изпълнявани през цялото времетраене на проекта. , Contracted Amount: 300.00 , Reported Amount: 0.00
  • Activity: Защита на индустриална собственост на национално и международно равнище и ползване на необходимата за това експертна помощ (ще бъде изпълнена чрез заявяване на обекти на интелектуална собственост - Европейски патент за изобретение 1 бр и национални полезни модели - 2бр): Ще бъде проведена процедура за избор на европейски и национален патентен представител (7-8ми месец) Като част от дейността ще бъдат направени проучвания за новост, изобретателска стъпка и ниво на техниката за технологията за повишаване на добивите от целевите щамове (8-ми -9-ти месец). Ще бъде разработена и подадена заявка за европейски патент (от 9-ти до 12-ти месец) Ще бъдат извършени проучвания за новост, изобретателска стъпка и ниво на техниката за съставите на крайните продукти.(10-ти -11-ти месец) Ще бъдат разработени и подадени поне две заявки за полезен модел. (от 11-ти до 12-ти месец) Необходимо е интелектуалната собственост, възникнала в резултат на изпълнението на проекта, да бъде защитена. Това ще ни осигури значително по-добра конкурентоспособност, тъй като за периодите на действие на патента и полезните модели, ще можем да ограничим копирането на постигнатите от нас резултати. Това ще ни направи лидери на целевите пазари., Contracted Amount: 12 000.00 , Reported Amount: 11 850.00

Participating Organizations

Partners None
Contractors
  • Contractor: VALCHEVA CONSULT, Contracted Amount*: 8 295.00 , Reported Amount**: 11 850.00
  • Contractor: FOT Ltd, Contracted Amount*: 55 300.00 , Reported Amount**: 79 000.00
Subcontractors None
Members of the Consortium None

Notes:

* The projected contract value may be lower than the reported one because of any of the following reasons:

  • For physical person, the contracted value does not include the employer expenses, which are admissible expenses and are accounted under the project
  • The Beneficiary has reported expense only with an invoice without a contract with the selected contractor
  • The beneficiary has reported over again expenses to the MA

** This column represents the amount of costs claimed by the beneficiary

Indicators

Indicator 1 Финансирани проекти за еко-иновации, Measure Unit: Брой, Base Value: 0.00 , Target amount: 1.00 , Reached amount: 1.00
Indicator 2 Private investment matching public support for innovation or R&D projects (all activities), Measure Unit: евро, Base Value: 0.00 , Target amount: 39 773.40 , Reached amount: 39 773.40
Indicator 3 Number of enterprises receiving support, Measure Unit: предприятия, Base Value: 0.00 , Target amount: 1.00 , Reached amount: 1.00

Financial Information

Total Project cost 259 300.00 BGN
Grant 181 510.00 BGN
Self amount 77 790.00 BGN
Total actual amounts paid 170 379.56 BGN
Percentage of EU co-financing 85.00 %

Financial Corrections

None

Notes:

1 The quoted value represents the maximum amount of the imposed financial correction. Depending on the performance of the contract, the actual amount of the deducted financial correction may be lower.

2 A financial correction with a zero total value means that it has been canceled as a result of a court judgment.

Procurements

Procedure 1 Subject to due process: Закупуване и доставка на материали и консумативи, необходими за създаване на прототип на технология и прототипи на 4 вида крайни продукти, съдържащи витамин К2, както следва: обособена позиция 1 Консумативи и реактиви, необходими за изработване и тестване на прототипи и обособена позиция 2 Синтетични гени, получени чрез ДНК синтез и олигонуклеотиди, необходими за изработване и тестване на прототипите, Estimated Amount: 79 000.00
  • Differentiated position 1: Обособено позиция 1 Консумативи и реактиви, необходими за изработване и тестване на прототипи
    Contractor: FOT Ltd
    Contract total funded value: 55 300.00
  • Differentiated position 2: Обособена позиция 2 Синтетични гени, получени чрез ДНК синтез и олигонуклеотиди, необходими за изработване и тестване на прототипите
    Contractor: FOT Ltd
    Contract total funded value: 55 300.00
Procedure 2 Subject to due process: Заявяване на европейски патент за изобретение (в т.ч. проучвания, хонорар на представител ИС, такси за заявяване) - 1 бр., Estimated Amount: 7 000.00
  • Differentiated position 1: Заявяване на европейски патент за изобретение (в т.ч. проучвания, хонорар на представител ИС, такси за заявяване) - 1 бр.
    Contractor: VALCHEVA CONSULT
    Contract total funded value: 3 430.00
Procedure 3 Subject to due process: Заявяване на полезен модел - 2 бр (в т.ч. проучвания, хонорар на представител ИС, заявителна такса), Estimated Amount: 5 000.00
  • Differentiated position 1: Заявяване на полезен модел - 2 бр (в т.ч. проучвания, хонорар на представител ИС, заявителна такса)
    Contractor: VALCHEVA CONSULT
    Contract total funded value: 3 430.00
Procedure 4 Subject to due process: Осигуряване на публичност и визуализация на проекта (чрез изработка и поставяне на 1бр информационна табела), Estimated Amount: 300.00

Notes:

All amounts are in Bulgarian lev (BGN) / 1 EUR = 1,95583 BGN